還在苦惱 T 細(xì)胞分型鑒定？看這篇就夠了！

來(lái)源: | 作者:/ | 發(fā)布時(shí)間: 2025-07-17 | 427 次瀏覽 | 分享到:

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免疫細(xì)胞療法包含多種利用宿主免疫反應(yīng)來(lái)治療免疫疾病和癌癥的方法，其中包括 CAR-T 細(xì)胞療法、Treg 療法以及 TILs 療法。以 CAR-T 細(xì)胞療法為例，其整個(gè)工作流程如圖 1 所示，包含了 T 細(xì)胞分離、CAR 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、CAR-T 細(xì)胞培養(yǎng)與擴(kuò)增、細(xì)胞活性檢測(cè)及 CAR 表達(dá)分析等、回輸治療、療效評(píng)估等步驟。

在整個(gè)過程中 T 細(xì)胞的分型鑒定是不可或缺的，Bio-Techne 提供 T Cell 多色流式檢測(cè) Panel，助力您在免疫細(xì)胞療法中快速、準(zhǔn)確地鑒定分析 T 細(xì)胞表型。

圖 1 患者特異性免疫療法流程概覽。供體的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）樣本需經(jīng)過 T 細(xì)胞篩選（Stage 1）和富集（Stage 2）處理。T 細(xì)胞經(jīng)過改造以表達(dá)嵌合抗原受體（CAR）（Stage 3），從而能夠識(shí)別腫瘤細(xì)胞受體，并在收獲（Stage 5）之前于細(xì)胞培養(yǎng)中進(jìn)行擴(kuò)增（Stage 4）。最終的嵌合抗原受體 T 細(xì)胞（CAR-T 細(xì)胞）產(chǎn)品在重新輸回患者體內(nèi)（Stage 7）之前要先進(jìn)行分型鑒定（Stage 6）。

流式細(xì)胞 Panel 檢測(cè)記憶 T 細(xì)胞

樣本中各類記憶 T 細(xì)胞亞群的比例，會(huì)對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答的擴(kuò)增潛能和功能產(chǎn)生顯著影響。表 1 中是 Bio-Techne 提供的已驗(yàn)證的多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，針對(duì)記憶 T 細(xì)胞標(biāo)志物（如 CD45RO 和 CCR7）對(duì)人 PBMC 進(jìn)行表型分析。

標(biāo)志物	熒光染料	貨號(hào)
CD3	mFluor? Violet 450	FAB100MFV450
CD4	mFluor? Violet 500	FAB3791MFV500
CD8	Alexa Fluor? 700	FAB1509N
CD45RA	mFluor? Violet 610	FAB11444MFV610
CD45RO	Alexa Fluor?647	FAB10642R
CCR7	PE	FAB197P

表 1 檢測(cè)記憶 T 細(xì)胞的流式細(xì)胞 Panel

流式細(xì)胞 Panel 檢測(cè) T 細(xì)胞活化

T 細(xì)胞在體外接觸到特定抗原或外界刺激時(shí)會(huì)被激活，分析早期和晚期激活標(biāo)志物的表達(dá)模式，能夠加深對(duì)機(jī)體免疫反應(yīng)的理解。表 2 中是 Bio-Techne 提供的已驗(yàn)證的多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，可識(shí)別 T 細(xì)胞上的激活標(biāo)志物，如 CD25、CD69 和 CD38。

標(biāo)志物	熒光染料	貨號(hào)
CD3	mFluor? Violet 450	FAB100MFV450
CD4	mFluor? Violet 500	FAB3791MFV500
CD8	Alexa Fluor? 700	FAB1509N
CD25	mFluor? Violet 610	FAB1020MFV610
CD38	Alexa Fluor?647	FAB2404R
CD69	PE	FAB23591P

表 2 檢測(cè) T 細(xì)胞活化的流式細(xì)胞 Panel

流式細(xì)胞 Panel 檢測(cè) T 細(xì)胞耗竭

抑制性受體的表達(dá)對(duì)于調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)至關(guān)重要，然而這些受體的異常且持續(xù)表達(dá)可能會(huì)導(dǎo)致免疫功能異常。表 3 中是 Bio-Techne 提供的已驗(yàn)證的多色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，可用于分析 T 細(xì)胞中的耗竭標(biāo)志物，如程序性死亡受體 1（PD-1）、T 細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子 3（TIM-3）和淋巴細(xì)胞激活基因 3 蛋白（LAG-3）。

標(biāo)志物	熒光染料	貨號(hào)
CD3	mFluor? Violet 450	FAB100MFV450
CD4	mFluor? Violet 500	FAB3791MFV500
CD8	Alexa Fluor? 700	FAB1509N
LAG-3	mFluor? Violet 610	FAB23193MFV610
PD-1	Alexa Fluor?647	FAB10863R
TIM-3	PE	FAB2365P

表 3 檢測(cè) T 細(xì)胞耗竭的流式細(xì)胞 Panel

Bio-Techne 流式細(xì)胞 Panel 在 T 細(xì)胞免疫療法中的應(yīng)用如下：

（參考圖 1）

最初，從患者供體中分離出 PBMC。由于 CAR-T 細(xì)胞的最終產(chǎn)量可能會(huì)受到起始原材料的影響，因此通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)記憶 T 細(xì)胞、活化 T 細(xì)胞和耗竭 T 細(xì)胞的比例，為免疫細(xì)胞群體的異質(zhì)性設(shè)定了一個(gè)基準(zhǔn)，并且如果在工程化之前分離 T 細(xì)胞，還可以確定樣本的總體純度（圖 1，Stage 1）。

圖 2 展示了免疫細(xì)胞治療過程（圖 1）的 Stage 1 (Day 0)，供體 PBMCs 中表達(dá)記憶標(biāo)志物（CD45RO/CD45RA）、激活標(biāo)志物（CD69/CD38）和耗竭標(biāo)志物（TIM-3/LAG-3）的 T 細(xì)胞亞群分型。

圖 2 采用流式細(xì)胞術(shù)的多色 T 細(xì)胞檢測(cè) Panel 對(duì) PBMC 細(xì)胞進(jìn)行 T 細(xì)胞記憶、激活和耗盡的表征。冷凍保存的人（第 0 天）PBMCs 復(fù)蘇后，用三種流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) panel 進(jìn)行染色，以評(píng)估其在 T 細(xì)胞激活之前的初始（na?ve）、記憶、耗竭和激活表型。PBMCs 首先用 anti-human CD3 mFluor? Violet 450、CD4 mFluor? Violet 500、CD8 Alexa Fluor^? 700 以及 Live/Dead 750/777 viability dye 進(jìn)行染色，隨后用三種不同的檢測(cè) Panel 分別評(píng)估 T 細(xì)胞的 1）記憶（CD45RO Alexa Fluor^? 647、CD45RA mFluor? Violet 610 和 CCR7 PE），2）耗竭（PD-1 Alexa Fluor^? 647、TIM-3 PE 和 LAG-3 mFluor? Violet 610），以及 3）激活（CD25 mFluor? Violet 610、CD69 PE 和 CD38 Alexa Fluor^? 647）。

在 T 細(xì)胞激活和細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增過程中（圖 1，Stage 2），通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行免疫表型分析，用于評(píng)估 T 細(xì)胞激活的變化以及 T 細(xì)胞亞群分布的總體變化。這些變化對(duì)于理解 T 細(xì)胞工程的成功與否以及最終產(chǎn)品的產(chǎn)量至關(guān)重要。

圖 3 展示了免疫細(xì)胞治療過程（圖 1）Stage 2：擴(kuò)增 T 細(xì)胞的第 2 天激活表型以及第 9 天的記憶和耗竭表型鑒定。

圖 3 采用流式細(xì)胞術(shù)的多色 T 細(xì)胞檢測(cè) Panel 對(duì)激活的 T 細(xì)胞進(jìn)行 T 細(xì)胞記憶、激活和耗盡的表征。人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）用生物素標(biāo)記的 GMP Anti-Human CD3（貨號(hào) MAB11411-GMP）和 GMP Anti-Human CD28（貨號(hào) MAB11412-GMP）與 M-270 磁珠偶聯(lián)，并加入 200 IU/mL 的 GMP Recombinant Human IL-2（貨號(hào) BT-202-GMP）刺激 9 天。第 9 天擴(kuò)增的 T 細(xì)胞 anti-human CD3 mFluor? Violet 450、CD4 mFluor? Violet 500、CD8 Alexa Fluor^? 700 以及 Live/Dead 750/777 viability dye 進(jìn)行染色，隨后用三種不同的檢測(cè) Panel 分別評(píng)估 T 細(xì)胞的 1）記憶（CD45RO Alexa Fluor^? 647、CD45RA mFluor? Violet 610 和 CCR7 PE），2）耗竭（PD-1 Alexa Fluor^? 647、TIM-3 PE 和 LAG-3 mFluor? Violet 610），以及 3）激活（CD25 mFluor? Violet 610、CD69 PE 和 CD38 Alexa Fluor^? 647）。

流式細(xì)胞術(shù)可檢測(cè)供體 T 細(xì)胞之間的記憶、激活和耗竭標(biāo)志物的差異。圖 4 展示了從第 0 天到第 2 天（用于激活）或第 9 天（用于記憶和耗竭）使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) Panel，可以提供關(guān)于供體 T 細(xì)胞隨時(shí)間變化的定量數(shù)據(jù)。

圖 4 T 細(xì)胞記憶、激活和耗竭檢測(cè) Panel 追蹤檢測(cè) T 細(xì)胞群隨時(shí)間的變化。人 PBMCs 被用生物素標(biāo)記的 GMP Anti-Human CD3 (貨號(hào) MAB11411-GMP) 和 GMP Anti-Human CD28 (貨號(hào) MAB11412-GMP) 與 M-270 Dynabeads + 200 IU/mL GMP Recombinant Human IL-2 (貨號(hào) BT-202-GMP) 刺激 9 天，如圖 4。在激活后，分析了 Day 0（Stage1）和 Day 9（A、B）以及 Day 2（C）的 CD45RO+/CCR7+中央記憶 T 細(xì)胞（A）、PD-1+細(xì)胞（B）和 CD25+/CD69+細(xì)胞（C）的表達(dá)差異。

Bio-Techne 旗下的子品牌 R&D Systems? 及 Novus Biologicals?，可提供多達(dá) 22000+種流式抗體。其免疫細(xì)胞標(biāo)志物抗體產(chǎn)品組合助您構(gòu)建多色 T 細(xì)胞檢測(cè) Panel，用于全面評(píng)估 T 細(xì)胞的記憶、激活和耗竭表型。

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